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大肠实验方法原理

所谓大肠菌群，是指在37℃培养24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢的总称。主要由肠科中四个属内的细菌组成，即埃希氏属、柠檬酸属、克雷伯氏菌属和肠属。

水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群近似数（MPN）表示。在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢等多种细菌。这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前，国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。

大肠菌群检测操作步骤

1 水样稀释

检测所需水样为100mL。若水样污染严重，可对水样进行稀释。取10 mL水样加入到90 mL无菌水中，必要时可加大稀释度，水样按照10倍逐级稀释。

2 定性反应

用100 mL的无菌稀释瓶量取100 mL水样，加入培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解后，放入44.5℃的培养箱内培养24h。

3 51孔定量盘法

3.1 用100 mL的无菌稀释瓶量取100 mL水样，加入培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解。

3.2 将前述100mL水样全部倒入51孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除孔气泡，然后用程控定量封口机封口。放入44.5℃的培养箱内培养24h。

3.3 无需稀释检测范围：1-200MPN/100mL粪大肠菌群（耐热大肠菌群）

4 97孔定量盘法

4.1 将100mL水样全部倒入97孔无菌定量盘内，其余步骤与6.3.1、6.3.2条款相同。

4.2 无需稀释检测范围：1-2419MPN/100mL粪大肠菌群（耐热大肠菌群）

滤膜法(MF，membranefilter)滤膜法：是目前为流行的检测水中大肠群的方法。滤膜法的具体步骤是首先将一定量的水体样本注入0.45μm的滤膜过滤，经过抽滤，水中的细菌则被留在滤膜上，将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上培养24h，温度为恒温37℃，这使得菌群因发酵乳糖而使得滤膜出现紫红色，通过计算滤膜上的菌落进而计算出单位样本中的大肠的数量。

用ISO9308－1规定的滤膜法测定水中大肠回收率均值为94.7%，批内变异系数小于10%，检出限为500mL水样可检出1个CFU。该方法费用较低、原理简单、利于推广，但检测时间相对较长、步骤繁琐、干扰因素多，不适于大量样品的分析，无法满足污染物品快速检测需求。